大鼠elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中大鼠TNF-α的濃度。大鼠TNF-α捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上，當加入標本或參考品時，其中的大鼠TNF-α會與捕獲抗體結(jié)合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗大鼠TNF-α抗體后，抗大鼠TNF-α抗體與大鼠TNF-α接合，形成夾心的免疫復合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。

　　生物素與親合素特異性結(jié)合，親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。加入顯色劑，若樣本中存在TNF-α將會形成免疫復合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測，讀其450nm處的OD值，大鼠TNF-α濃度與0Dm值之間呈正比，通過參考品繪制標準曲線，對照未知樣本中0D值，即可算出標本中TNF-α濃度。

　　大鼠elisa試劑盒操作步驟：

　　1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數(shù)，取出所需板條放置在框架內(nèi)，暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封，保存于4℃。

　　2.建議設(shè)置本底較正孔，即空白孔，設(shè)置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。

　　3.分別將標本或不同濃度標準品（100u1/孔）加入相應(yīng)孔中，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫孵育120分鐘。對于血清或血漿標本，請加入50u1樣本分析緩沖液后加50u1標本，如稀釋量大，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。

　　4.洗板5次，且置厚吸水紙上拍干。

　　5.加入生物素化抗體工作液（100u1/孔）。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫孵育60分鐘。

　　6.洗板5次，且置厚吸水紙上拍干。

　　7.加入酶結(jié)合物工作液（100u1/孔）。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，避光室溫孵育20分鐘。

　　8.洗板5次，且置厚吸水紙上拍干。

　　9.加入顯色劑TMB100u1/孔，避光室溫孵育20分鐘。

　　10.加入終止液50u1/孔，混勻后即刻測量0D450值。